Как поставить точный диагноз на сифилис


Диагноз сифилиса ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

В случае полного отсутствия возможности использования методов лабораторной диагностики сифилиса, Всемирная организация здравоохранения (1999 г.) и МЗ РФ ( приказ № 327 от 25.07.2003 г.) допускают использование так называемого синдромного (эпидемиологического) лечения сифилиса на основе клинико-анамнестических данных.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Подтвержденный диагноз сифилиса у полового партнера
Случайная половая связь без барьерного предохранения в период ,соответствующий инкубационному периоду
Наличие в прошлом высыпаний в области половых органов,увеличения лимфоузлов

Осмотр половых органов,кожных покровов,слизистой рта,ануса
Пальпация высыпных элементов при их наличии
Пальпация периферических лимоузлов

Наличие характерных для различных периодов сифилиса поражений кожи и слизистых.
Увеличение лимфоузлов

Обнаружение T.pallidum в материале из очагов поражения,лимфатических узлов,амниотической жидкости,ликвора

Обнаружение типичных форм трепонемы

Наличие флюоресцирующих трепонем

Обнаружение специфической ДНК T.pallidum

Нетрепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотке крови антител против фосфолипидов тканей,разрушенных сифилитической инфекцией и липидов мембраны Т.pallidum

Макроскопический тест
Тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR)

Микроскопический тест
VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
Количественный тест VDRL

Трепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотки крови антител против антигенов бледной трепонемы

Положительный (позитивный) результат

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Ренгенография
аорты
длинных трубчатых костей
грудины
костей черепа
суставов

Ранний врожденный сифилис
Поздний врожденный сифилис
Третичный сифилис

Неврит слухового нерва
Сифилитический лабиринтит

Неврит зрительного нерва
Паренхиматозный кератит

Также применяются и рутинные методы исследования — общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение
его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.
Серологическое исследование (от от лат. serum — сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.
В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).
В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

  • Беременные женщины
  • Доноры крови и органов для трансплантации
  • Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
  • Военнослужащие
  • Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
  • Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
  • Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

  • Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
  • Лицам с любыми генитальными язвами
  • Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
  • Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
  • Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
  • Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса

Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),
липопротеинам, высвобождаемых из поврежденных клеток хозяина, вследствии сифилитической инфекции и липидам,входящим в состав мембраны бледной трепонемы. Антилипидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонематозов, но и в ответ на на некоторые острые и хронические заболевания, при которых наблюдается разрушение тканей.Антилипидные антитела (реагины) образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.В основном нетрепонемные тесты применяются в двух случаях:

  • Нетрепонемные тесты, в связи с дешевизной,доступностью простотой и быстрым сроком исполнения, применяются для скрининга сифилиса как отборочные реакции.
  • По изменению количественных нетрепонемных тестов судят о степени эффективности лечения сифилиса и устанавливают его излеченность.Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами для установки диагноза сифилиса и проводятся до начала лечения,в процессе лечения и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

Снижение титров нетрепонемных тестов в 4 и более раза
в течении года после лечения подверждает эффективность проведенной терапии сифилиса и является критерием его излеченности( Приказ Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г,МЗ РФ Приказ от 25 июля 2003 г. N 327,Рекомендации CDC (USA) 2006)

В качестве антигена для проведения нетрепонемных тестов используется стандартный кардиолипин-лецитин -холестероловый антиген (который является одним из компонентов тканей человеческого организма и содержит липиды, характерные для бледной трепонемы) для проведения микрореакции преципитации,в случае определения реагинов реакцией связывания комплимента(реакции Вассермана),помимо кардиолипинового антигена применяют еще и ультразвуковой дезинтеграт культуральных трепонем (трепонемный антиген).К нетрепонемный тестам относят:

  • RPR (Rapid Plasma Reagins) тест быстрых реагинов (российский аналог микрореакция преципитации МР)
  • VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
  • Реакция связывания комплимента (реакция Вассермана)

Недостатки нетрепонемных тестов

  • Ложноотрицательные результаты — при исследовании неразведенных образцов сыворотки, содержащих большое количество антител,за счет так называемого феномена прозоны. Это явление может наблюдаться на ранних стадиях сифилиса и у пациентов с сопутствующей ВИЧ-инфекцией.
  • Недостаточная чувствительность для диагностики поздней стадии сифилиса
  • Ложноположительные результаты (биологические ложноположительные реакции) при наличии других острых или хронических заболеваний.

Как и при нетрепонемных тестах при проведении трепонемных тестов используется иммунологическая реакция антиген-антитела.Но в качестве антигенов применяются трепонемные антигены — либо интактные трепонемы либо очищенные и ультраозвученные трепонемы либо рекомбинантные антигены.Для проведения и обнаружения результатов реакции антиген-антитела используют более сложные и дорогие различные методы.Наиболее часто используются следующие трепонемные тесты.

  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях
  • Реакция пассивной агглютинации (РПГА — TPHA)
  • Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе рекомбинатный ИФА
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
  • Иммуноблотинг

Трепонемные тесты являются подтверждающими сифилис тестами,однако в небольшом проценте при их проведении могут встречаться ложноположительные результаты.
Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности.

Иммуноблотинг (Western blot) для определения специфических IgM либо IgG является одним из современных и точных методов диагностики сифилиса.При проведении иммуноблотинга T.pallidum подвергаются электрофорезу , в результате чего происходит разделение белковых иммунодетерминант. Затем проводится обработка разделенных точек — blots исследуемой сывороткой и антителами к IgG либо IgM, помеченных ферментами или радиоактивными веществами. Выявленные с помощью иммуноблотинга определенные иммунодетерминанты являются диагностическими признаками сифилиса.
IgG-иммуноблотинг (IgG Western blot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgM Western blot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.Специфические противотрепонемных антител класса IgM,обнаруживатся в конце второй недели заболевания. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после начала заболевания.К моменту появления клинических симптомов сифилиса в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела).Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения.Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени,а иногда и всю жизнь.

Сроки появления положительных серологических реакций при сифилисе

Противотрепонемные IgG положит. РИФ,ИФА,РПГА

Противотрепонемные IgM положит. Ig M — ИФА/IgM -иммуноблотинг

Реагины (IgM + IgG) положит. МР (RPR/VDRL)

Частота положительных результатов серореакций при разных стадиях сифилиса

В мировой медицинской практике для диагностики сифилиса используют три реакции: нетрепонемный тест — RPR или VDRL и два трепонемных тестов — реакцию иммунофлюоресценции ( РИФ-FTA) и реакцию пассивной гемоагглютинации (РПГА — TPHA)

нет сифилиса или инкубационный период
или очень ранняя стадия

нелеченый или недавно леченый сифилис

первичный сифилис или
ложноположительные РПР и РИФ

ложноположительные РПР и РПГА или
ложноотрицательная РИФ

леченый сифилис или нелеченый поздний
сифилис

биологическая ложноположительная
реакция

ранний первичный сифилис или недавно
леченый сифилис или ложноположительная РИФ

пролеченый сифилис или
ложноположительная РПГА

В России для диагностики сифилиса еще применяют реакцию связывания комплимента (реакцию Вассермана) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительные РИФ и Ig ИФА как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса.У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемными или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления шанкра становятся положительными стандартные серологические реакции — с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и ИФА уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.

При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок — 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ — 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепонем невысок (40-60%).
При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации — 80-90-100%.

Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.

Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.

Нейросифилис и висцеральный сифилис

Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).

При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.
При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

Это самый сложный вопрос в сифилидологии — положительные серореакции на сифилис при отсутствии клинических симптомов.
Различают пять ситуаций

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные (хотя при позднем скрытом сифилисе — давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные)
  • нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации — проведении лечения скрытого сифилиса по существующим инструкциям

Серопозитивность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные — значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается снижение титров в течении года в 4 и более раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Если контрольные тесты не проводились — назначается количественный нетрепонемный тест (МР) в течении года с интервалом в 3 месяца

Серорезистентность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные — значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается их стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Дополнительное лечение сифилиса

Излеченный сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — отрицательные
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Снятие с учета

Если нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса в прошлом см.ситуация №1 или дополнительно:
-исключить ранний сифилис (серонегатив)- контрольный трепонемный и нетрепонемный тест через 2 недели
-исключить поздний скрытый сифилис — исследование ликвора,клинико-рентгенологическое исследование
-исключить ложноположительный трепонемный тест (провести 2-3 трепонемных теста,включая РИБТ) в динамике
-исключить невенерический трепанематоз
-провести лечение позднего скрытого сифилиса по существующим методикам.

Ложноположительные реакции на сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные
  • наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении сифилиса не имеет значения

Рекомендации:Выяснение причин ложноположительных реакций (АФС,коллагенозы,онкология,туберкулез,беременность и.т.д.)

По материалам venuro.ru

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

По материалам microbak.ru

Диагностика сифилиса намного сложнее диагностики других половых инфекций. Это объясняется тем, что возбудитель болезни не задерживается в половых путях, а проникает в организм и успешно прячется в теле человека, до определенного времени не выдавая себя симптомами и внешними проявлениями. И «поймать за хвост» эту инфекцию удается редко. Поэтому медики пользуются косвенными методами — серологическими реакциями, которые показывают не наличие самого возбудителя, а иммунный ответ организма.

Структурное изображение антител

Иммунный ответ — это сложный биохимический процесс, основу которого составляют антитела (белки-защитники) — IgM и lgG. Вначале появляются IgM, где-то спустя 7–10 дней после появления твердого шанкра, и сохраняются они в течение всего раннего сифилиса (то есть первые 2–4 года болезни). В позднем сифилисе IgM постепенно исчезают. Если болезнь обнаружена в раннем периоде, и проведено полноценное лечение, то IgM также исчезают. IgG вырабатываются в организме позже, примерно через 3–4 недели после появления твердого шанкра. Эти антитела сохраняются на всем протяжении болезни и остаются в течение нескольких лет даже после лечения.

Этим объясняется зависимость результатов разных анализов от периода болезни. Нетрепонемные тесты (РМП или RPR) реагируют на IgM. Поэтому они становятся положительными раньше трепонемных, и отрицательными — после проведенного лечения (или в третичном периоде). Трепонемные тесты (например, РПГА) реагируют на IgG, и, соответственно, выдают положительную реакцию позже и остаются положительными после лечения.

Кроме того, IgM, в отличие от IgG, являются очень крупными белками и менее специфичными, тесты на них часто ошибаются — IgM можно легко спутать с другими белками в крови. Поэтому нетрепонемные тесты часто выдают ложноположительные результаты.

Серологические реакции — анализы, которые показывают иммунный ответ организма. На разных периодах сифилиса активизируются разные типы антител. По этим типам врачи определяют стадию сифилиса.

Результаты анализов и клинические проявления напрямую зависят от иммунного ответа организма.

  • Первичный период характеризуется возникновением твердого шанкра — сифилитической язвы. В это время организм только начинает реагировать на инфекцию. Сразу после появления твердого шанкра иммунного ответа еще нет, и анализы крови будут отрицательными (серонегативная фаза первичного периода). Затем постепенно появляются антитела, иммунитет нарастает, и уже скоро серологические реакции дают положительный результат (серопозитивная фаза первичного периода).
    Нетрепонемные тесты покажут болезнь через семь–десять дней после возникновения твердого шанкра, трепонемные — через 3–4 недели.
    До того, как анализы крови станут положительными, диагноз можно подтвердить с помощью прямых методов диагностики — темнопольной микроскопии или ПЦР. Материалом для этих исследований служит соскоб с твердого шанкра. Эти анализы покажут, есть ли в язве бледные трепонемы или нет. Подробнее о том, как ведет себя иммунитет человека при сифилисе, читайте в отдельной статье.
  • Наиболее напряженный иммунитет к сифилису вырабатывается во вторичном периоде, когда тело человека полностью покрывается сыпью. В этот период становятся положительными все анализы — и трепонемные, и нетрепонемные. Еще в это время возможно исследование высыпаний с помощью прямых методов диагностики: бледную трепонему можно обнаружить во рту или в мокнущих элементах сыпи.
  • В третичном периоде иммунная система перестраивается, реакция организма приобретает аллергический характер: на коже появляются бугорки и гуммы. Снижаются и исчезают lgM, соответственно становятся отрицательными нетрепонемные тесты. Кроме того, в этот период поражается нервная система, и потому становятся положительными анализы при исследовании спинномозговой жидкости.
  • После полноценного лечения все кожные проявления исчезают, а нетрепонемные тесты становятся отрицательными. Трепонемные тесты могут оставаться положительными в течение нескольких лет и даже в течение всей жизни. О том, что ждет проболевших сифилисом, читайте в статье «Жизнь после лечения сифилиса».
  • Скрытой болезнь может быть как в раннем периоде, так в позднем. В раннем периоде, как правило, становятся положительными трепонемные и нетрепонемные тесты. Исследование спинномозговой жидкости дает отрицательный результат, так как нервная система еще не поражена. В позднем периоде постепенно остаются положительными только трепонемные тесты. Результаты исследования спинномозговой жидкости становятся положительными.

Поздний скрытый и пролеченный сифилис между собой очень похожи: отсутствуют клинические симптомы и остаются положительными серологические реакции. Чтобы различить эти два диагноза, проводят анализ на определение IgM: если антитела «М» есть, то сифилис считается скрытым, если нет — то пролеченным.

Подтвердить или исключить диагноз может только дерматовенеролог. Уролог или гинеколог могут лишь заподозрить болезнь по внешним признакам. И тогда они должны направить пациента к дерматовенерологу для дальнейшего обследования, лечения и наблюдения.

Диагноз «сифилис» основывается на совокупности следующих признаков:

  1. На наличии или отсутствии внешних проявлений и симптомов.
  2. На результатах минимум двух лабораторных исследований: нетрепонемного (РМП, или RW, или RPR) и трепонемного (РПГА или ИФА) тестов.
  3. На данных о том, был ли сифилис ранее, и проводили ли уже его лечение.

Тогда диагностика усложняется. Здесь врачи опираются только на анализы и сведения о проводимом или непроводимом ранее лечении.

  • Если нетрепонемный (один из РМП/RW/RPR) и трепонемный тест (РПГА/ИФА) — положительны, проводится дополнительный альтернативный трепонемный тест (ИФА, если первый тест был РПГА, и наоборот — РПГА, если был ИФА). Если тест становится отрицательным, то кровь пациента направляют в экспертную лабораторию и проводят дополнительные анализы. В случае если второй трепонемный тест становится положительным, ставят диагноз: «скрытый сифилис». Такое состояние может наблюдаться некоторое время после проведенного лечения. Если пациенту было проведено до этого лечение, то для того чтобы подтвердить диагноз, проводят дополнительное исследование на IgM. При положительных результатах — диагноз подтверждается, но исследование все равно рекомендуется повторить через 2 недели. При отрицательных результатах сифилис опровергается.
  • Если нетрепонемный тест (РМП/RW/RPR) отрицательный, а трепонемный (РПГА/ИФА) положительный, то состояние может оцениваться как «поздний сифилис» или «отсутствие сифилиса», если пациенту было проведено ранее полноценное лечение. Для разграничения этих двух состояний проводят дополнительный тест на IgM (ИФАIgM, РИФ-абс-IgM, Иммуноблоттинг-IgM). Если IgM в крови имеются, ставят «поздний сифилис» и лечат. Если нет — пациент считается здоровым.
  • Если RPR (или RW/РМП) положительный, РПГА положительный, а ИФА отрицательный (или наоборот: РПГА «-» и ИФА «+»), то результаты анализов вызывают сомнение и рекомендуется отправить кровь в экспертную лабораторию или провести альтернативные анализы (РИФ, Иммуноблоттинг).
  • Если нетрепонемный тест (PMП/RW/RPR) положительный, а трепонемный (РПГА/ИФА) отрицательный, то проводится дополнительный трепонемный тест (ИФА/РПГА). Если он дает положительный результат, то кровь направляют в экспертную лабораторию. Если отрицательный, то диагноз опровергается, а результат нетрепонемного теста признается ложноположительным.

Для более простого понимания материала приведем таблицу расшифровки результатов клинико-лабораторного исследования пациента:

По материалам polovye-infekcii.ru

Анализ на сифилис — один из самых частых анализов, который человеку приходиться сдавать в течение всей жизни. Все скрининги (массовые обследования населения), медосмотры, госпитализации — всё сопровождается исследованием крови на сифилис.

Вовсе не удивительно, что многие люди сталкиваются с положительными результатами анализов, совсем того не ожидая. У большинства в такой ситуации поднимается паника, возникает вопрос: «А бывает ли ошибочным анализ на сифилис?». Ответ: бывает!

Не стоит беспокоиться заранее — сифилис может быть ложным. Чтобы это проверить, нужно просто сдать дополнительные анализы.

Однако даже если положительный анализ на сифилис в итоге не подтвердился, сама ситуация все равно остается неприятной для человека. Возникают опасения: вдруг, все же, что-то да есть…

Чтобы развеять сомнения, подробно расскажем: как, когда и при каких условиях тест на сифилис может быть положительным.

Анализы могут показать ложный сифилис при разных состояниях человека: острые и хронические болезни, травмы, недавно поставленные прививки и т.д.

Все эти состояния объединяет то, что при них в крови образуются неспецифичные (созданные для борьбы с разными угрозами) белки — иммуноглобулины, они же — антитела.

Реакция Вассермана (RW) и другие анализы на сифилис реагируют на эти белки, принимая их за сифилитические, так как они похожи. Хотя в действительности организм мог создать неспецифичные белки для защиты от совсем другого возбудителя. В результате эти «безобидные» иммуноглобулины становятся причиной ложноположительных результатов на сифилис.

По разным причинам анализы на сифилис могут ошибочно стать положительными. Это состояние может быть кратковременным или сохраняться в течении нескольких лет. Ложные результаты можно условно поделить на «острые» и «хронические».

«Острые» ложные результаты появляются из-за острой болезни или травмы и сохраняются в течение 6 месяцев. Причиной их появления могут быть:

  • Острые инфекционные заболевания (как правило, с высокой температурой);
  • травма;
  • инфаркт миокарда;
  • вакцинация;
  • отравление.

«Хронические» ложные результаты появляются на фоне хронических состояний и могут повторяться более 6 месяцев. К таким состояниям относятся:

  • Заболевания соединительной ткани;
  • туберкулез, лепра и другие хронические бактериальные инфекции;
  • хронические вирусные инфекции: ВИЧ, гепатиты В, С, D и т.д.;
  • заболевания печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • возрастные изменения организма.

Хотя тесты на сифилис обладают довольно высокой точностью, иногда они все равно могут ошибаться. Цель большинства анализов на сифилис — проверить, есть ли в крови человека антитела, которые его организм выработал для защиты от бледной трепонемы. Для такой проверки исследователи берут либо настоящий возбудитель сифилиса (бледную трепонему), либо ее искусственные аналоги.

Точность анализов зависит от многих технических условий, но одно из самых важных — это материал, который используют для проверки. Если для анализа берут искусственные аналоги бледной трепонемы (эти анализы так и называются: нетрепонемные), результат будет менее точным. Если использовали реальную трепонему (трепонемные тесты) — анализ окажется значительно точнее.

Выходит, что среди всех тестов на сифилис чаще всего ошибаются нетрепонемные тесты: они больше остальных дают ложноположительный результат. Поскольку они являются самыми дешевыми, их применяют для массового обследования населения. А вот тех, у кого результат нетрепонемного теста оказывается положительным, обследуют уже с помощью более дорогих и точных трепонемных тестов.

К нетрепонемным тестам для массового обследования относятся: РМП, VDRL, USR, RPR и TRUST. Наиболее точные из этих тестов — RPR и TRUST. Вероятность их ошибки в положительную сторону составляет 1–2%. Чуть менее точные — РМП и VDRL. Вероятность их ошибки — 2–3%. Наименее точным является USR — его погрешность составляет 7%.

Среди трепонемных тестов (РИФ, РПГА, ИФА, иммуноблоттинг) вероятность ошибки составляет менее 1%.

Самые точные положительные результаты дают прямые методы исследования (особый подвид высокоточных анализов): темнопольная микроскопия (погрешность 0–2%) и ПЦР (погрешность 0–1%). Однако эти методы часто дают ложноотрицательный результат — то есть говорят, что болезни нет, когда на самом деле она есть. Это не позволяет использовать их в качестве основных тестов.

Для наиболее достоверных результатов вначале проводят один нетрепонемный тест, а потом — в случае положительного результата — один трепонемный.

Когда в результатах анализов на сифилис приходит «отрицательно» или «положительно», смысл однозначен и понятен. Но вот когда на бланке стоят 1–2 креста или написано «сомнительный результат», встает вопрос: «Что это такое, и может ли это означать ошибку теста?».

Совсем необязательно: сомнительный результат означает всего лишь небольшое количество антител в крови. Например, это может быть признаком раннего сифилиса (инкубационный период и первые недели твердого шанкра), когда антитела только появляются, или признаком позднего сифилиса (спустя 2–4 года), когда антитела (IgM) постепенно пропадают.

В этой ситуации, как и с резко положительным тестом, проводят дополнительный подтверждающий трепонемный тест.

Отрицательный результат дополнительного трепонемного теста может означать одно из двух:

  • Первый тест ошибся, и никакого сифилиса нет.
  • Антитела еще не успели выработаться, и сифилис находится в инкубационном/первичном периоде.

В любом случае, при сомнительных результатах скринингового теста рекомендуется повторить его через две недели.

Положительный результат трепонемного теста говорит о том, что сифилис точно есть, и пациент нуждается в лечении.

Когда сифилис подтвердился, не стоит паниковать. Смело обращайтесь в местный кожвендиспансер. Ни начальству, ни коллегам по работе, ни родственникам о вашей болезни не расскажут. Однако человек должен осознавать, что сифилис — заболевание инфекционное и высокозаразное, поэтому его окружение, особенно семья, подвергается серьезной опасности.

Если диагноз «сифилис» подтвердился, очень важно внимательно отнестись к следующим рекомендациям:

  • Дерматовенерологу следует показать своего партнера и всех членов семьи, так как, возможно, заражение уже произошло половым и бытовым путем.
  • Если у партнера и детей сифилис не обнаружен, они все равно должны получить превентивное лечение — небольшие дозы пенициллина, чтобы предотвратить развитие болезни, если заражение уже произошло. Подробнее о профилактике сифилиса читайте в отдельной статье.
  • Если человек работает, ему оформляют больничный на время лечения, — при этом на работе о болезни никого не оповещают. Во всех выписках и любой другой медицинской документации болезнь шифруется, а доступ к этой информации есть только у врачей. Медицинскую книжку, если она есть, выдают (или продлевают) сразу после проведенного лечения.
  • Пролеченный сифилис не опасен и не может быть причиной увольнения с работы или отказа в трудоустройстве.
  • Если заразился подросток, он/она также может обращаться в КВД, не опасаясь, что о болезни расскажут родителям. Ему/ей заведут отдельную карту, а обследование и лечение в КВД по месту жительства будут бесплатными.
  • После успешной терапии человеку должны выдать документ, подтверждающий пройденное лечение. Документ нужно обязательно сохранить и брать с собой на все медосмотры. Это избавит от лишних вопросов и внимания со стороны врачей, так как анализы после проведенного лечения могут еще долго оставаться положительными.

Бывает ли ложный сифилис у беременных? Конечно, бывает. На практике это нередкая ситуация.

Женщины сдают кровь на сифилис несколько раз за время беременности: в первые 12 недель, за несколько недель до родов (30–35 неделя) и непосредственно перед родами (38–40 неделя) — это необходимый минимум анализов.

Совсем неудивительно, что при положительном RW-анализе во время беременности у женщин сразу возникает вопрос: «Откуда сифилис?». Но переживать в этой ситуации не стоит: если за последние полгода-год у вас не менялся партнер, и вы уверены в своем и его здоровье, то анализ, скорее всего, является ошибочным.

Беременность — это полная перестройка организма, как на гормональном уровне, так и на уровне иммунитета. Организм мамы с первых дней старается защитить ребенка от любой угрозы и потому вырабатывает множество различных антител.

На эти антитела и реагируют почти все нетрепонемные анализы на сифилис.

Поэтому если нетрепонемный анализ на сифилис (RW или РМП/МР/RPR) показал, что болезнь у женщины есть, то будущей маме дополнительно назначают трепонемные тесты ИФА или РПГА — эти анализы более достоверны и смогут показать, точно ли болен человек.

О том, чем грозит болезнь новорожденному малышу, читайте в статье «Врожденный сифилис».

По материалам polovye-infekcii.ru


Adblock
detector