Ифа и rpr в диагностике сифилиса


ИФА — иммуноферментный анализ — является одним из самых прогрессивных методов диагностики сифилиса. Он выявляет признаки присутствия возбудителя заболевания на разных стадиях последнего. В основе анализа лежит выявление специфических антител, которые появляются в крови больного при внедрении в организм бледной трепонемы (бактериального возбудителя).

Метод ИФА работает не только для группы заболеваний, передающихся половым путем. В равной степени он применим и для диагностики самых разных болезней инфекционного характера. Принцип проведения анализа был разработан еще в 60-х годах прошлого столетия. Однако активно использоваться он начал только спустя 20 лет.

Сейчас ИФА применяется для диагностики сифилиса, СПИДа, туберкулеза и многих других болезней. Для обнаружения антител используются специально разработанные ферменты, активно реагирующие на специфические белки крови.

Больной может сам прийти в клинику для проведения анализа, если у него присутствуют подозрительные симптомы (характерные высыпания на теле, повышенная температура, боли в мышцах и пр.). Однако на определенных стадиях недуг не проявляется столь явно. Через несколько недель после инфицирования симптомы исчезают, и пациент может ошибочно считать себя выздоровевшим. По этой причине существует ряд случаев, когда анализ ИФА проводится в обязательном порядке:

  1. При устройстве на работу на предприятия, где есть контакт с большим количеством людей, продуктами питания, детскими и медицинскими товарами.
  2. При постановке на учет беременной. Болезнь передается от больной матери младенцу, поэтому важно ее вовремя выявить.
  3. При донорстве крови. Перед тем как сдавать кровь, донор обязан проверить ее на наличие опасных инфекций, в том числе и сифилиса.
  4. Во время подготовки к операции. Проведение такого рода вмешательств подразумевает прямой контакт с кровью больного. Это может быть небезопасно для медперсонала и других пациентов клиники.
  5. При обнаружении симптомов у одного из половых партнеров. В этом случае второй партнер также обязан сдать кровь на пробу.
  6. При прохождении воинской службы, а также в случае тюремного заключения. Обе ситуации предполагают продолжительный контакт с большим количеством людей. Поскольку недуг передается не только половым, но и контактно-бытовым путем, любой человек из окружения инфицированного находится под угрозой.

Главная особенность ИФА — высокая точность данных. Позволяет не просто обнаружить антитела, но и определить их количественное соотношение.

Это значит, что иммуноферментный анализ позволяет с 99,99%-ной вероятностью выявить болезнь и одновременно определить, на какой стадии развития болезнь в данный момент находится.

При проведении ИФА у пациента берут кровь из вены. Затем ее особым образом подготавливают и размещают на полистироловой панели со множеством лунок. При диагностике в сыворотку крови добавляют специальные ферменты, которые при наличии антител/антигенов недуга образуют с ними прочные соединения.

Результатом образования таких соединений становится изменение цвета плазмы крови в лунке (с бесцветного — на ярко-желтый). Работнику лаборатории достаточно визуально оценить результат, чтобы понять, что на панели — кровь больного.

При ИФА на сифилис оценивают наличие 3 классов антител (иммуноглобулинов): A, M и G. Эти вещества образуются в крови инфицированного человека в строго определенной последовательности:

  1. Наличие иммуноглобулина A указывает на то, что с момента заражения бледной трепонемой прошло больше месяца.
  2. Антитела M выявляются при длительном присутствии инфекции в организме. Также они могут быть реакцией на обострение хронической болезни.
  3. Иммуноглобулин G организм вырабатывает на самом пике заболевания, а также после уже проведенного лечения.

Интенсивность окрашивания плазмы крови в ярко-желтый цвет при проведении ИФА напрямую указывает на количество антител. Если цвет плазмы слегка желтоватый, результаты ставят под сомнение и процедуру повторяют. При отрицательном результате цвет плазмы не меняется и остается прозрачным.

На протяжении всей жизни человеку довольно часто приходится делать ИФА на сифилис (перед устройством на работу и пр.). Положительный результат всегда становится стрессом. Однако не стоит паниковать раньше времени! Иногда ИФА может дать ложноположительный результат. В этом случае есть смысл провести повторное обследование.

Специалисты не советуют беспокоиться после первого же положительного результата ИФА, поскольку это исследование направлено на выявление не самой бледной трепонемы, а антител, которые организм вырабатывает в ответ на атаку патогенных бактерий. ИФА — анализ с высокой точностью (вероятность погрешности меньше 1%). При наличии сомнений врачи не ставят диагноз сразу же, а предлагают пациенту сдать кровь еще раз.

Ложноположительный ответ ИФА возможен при болезнях:

  • соединительной ткани, суставов (васкулит, ревматоидный артрит и пр.);
  • сердца (главным образом это касается воспалительных заболеваний: миокардита, эндокардита);
  • эндокринной системы (диабет);
  • инфекционных (гепатит, туберкулез и пр.).

Ложноположительный результат может быть при беременности или в том случае, если незадолго до ИФА пациенту была проведена вакцинация. Изменить итоги анализа не в лучшую сторону способно и употребление алкоголя, наркотиков.

В достаточно большом количестве случаев положительную реакцию дает проверка крови пациентов, которые уже прошли лечение. У 10% излеченных положительная реакция остается на всю жизнь, поскольку в крови постоянно циркулирует определенное количество антител как иммунный ответ на возникшее однажды заболевание.

Наряду с ложноположительным возможна и ложноотрицательная реакция. В самом начале болезни, когда трепонема только попала в организм, антитела вырабатываются в недостаточном для выявления количестве. Ферменты могут их не зафиксировать, поэтому итоги ИФА оказываются отрицательными.

При наличии подозрений на сифилис (пациент имел незащищенный половой акт, тем или иным образом контактировал с возможными больными и пр.) проводится повторный анализ.

Существует определенный протокол действий на тот случай, если у пациента со 100%-ной достоверностью был выявлен недуг. В первую очередь обследование проходит его половой партнер: муж, жена, другие лица, вступавшие с зараженным в интимную связь. В этом плане медики категоричны. Обследование сексуальных партнеров является обязательным во избежание распространения опасного заболевания.

Лечение проходят все члены семьи больного, даже если их анализы показали отрицательный результат. Помним: сифилис — острозаразная болезнь, передающаяся контактно-бытовым путем. Дети и другие члены семьи могут получить трепонему во время пользования санузлом, общими полотенцами, посудой.

Как только данные ИФА на сифилис подтвердились, инфицированный и контактировавшие с ним лица проходят терапию антибиотиками. Все рекомендации врача — дозировку, периодичность приема лекарств — необходимо соблюдать в точности!

На время лечения работающим гражданам выдается справка с зашифрованным согласно МКБ-10 диагнозом. После полного излечения медицинская книжка продлевается. Выздоровевший работник может приступать к своим непосредственным обязанностям. Работодатель не вправе отказать ему в восстановлении на рабочем месте.

Таковы основные данные по проведению ИФА. Заразившимся нужно помнить: постановка диагноза не ставит крест на всей последующей жизни больного. Сейчас существуют эффективные препараты, позволяющие надежно излечивать это заболевание. Вовремя проведенные обследование и лечение позволяют избежать самых опасных последствий недуга и защитить от него других членов общества.

По материалам sifilis24.ru

Диагностика сифилиса намного сложнее диагностики других половых инфекций. Это объясняется тем, что возбудитель болезни не задерживается в половых путях, а проникает в организм и успешно прячется в теле человека, до определенного времени не выдавая себя симптомами и внешними проявлениями. И «поймать за хвост» эту инфекцию удается редко. Поэтому медики пользуются косвенными методами — серологическими реакциями, которые показывают не наличие самого возбудителя, а иммунный ответ организма.

Структурное изображение антител

Иммунный ответ — это сложный биохимический процесс, основу которого составляют антитела (белки-защитники) — IgM и lgG. Вначале появляются IgM, где-то спустя 7–10 дней после появления твердого шанкра, и сохраняются они в течение всего раннего сифилиса (то есть первые 2–4 года болезни). В позднем сифилисе IgM постепенно исчезают. Если болезнь обнаружена в раннем периоде, и проведено полноценное лечение, то IgM также исчезают. IgG вырабатываются в организме позже, примерно через 3–4 недели после появления твердого шанкра. Эти антитела сохраняются на всем протяжении болезни и остаются в течение нескольких лет даже после лечения.

Этим объясняется зависимость результатов разных анализов от периода болезни. Нетрепонемные тесты (РМП или RPR) реагируют на IgM. Поэтому они становятся положительными раньше трепонемных, и отрицательными — после проведенного лечения (или в третичном периоде). Трепонемные тесты (например, РПГА) реагируют на IgG, и, соответственно, выдают положительную реакцию позже и остаются положительными после лечения.

Кроме того, IgM, в отличие от IgG, являются очень крупными белками и менее специфичными, тесты на них часто ошибаются — IgM можно легко спутать с другими белками в крови. Поэтому нетрепонемные тесты часто выдают ложноположительные результаты.

Серологические реакции — анализы, которые показывают иммунный ответ организма. На разных периодах сифилиса активизируются разные типы антител. По этим типам врачи определяют стадию сифилиса.

Результаты анализов и клинические проявления напрямую зависят от иммунного ответа организма.

  • Первичный период характеризуется возникновением твердого шанкра — сифилитической язвы. В это время организм только начинает реагировать на инфекцию. Сразу после появления твердого шанкра иммунного ответа еще нет, и анализы крови будут отрицательными (серонегативная фаза первичного периода). Затем постепенно появляются антитела, иммунитет нарастает, и уже скоро серологические реакции дают положительный результат (серопозитивная фаза первичного периода).
    Нетрепонемные тесты покажут болезнь через семь–десять дней после возникновения твердого шанкра, трепонемные — через 3–4 недели.
    До того, как анализы крови станут положительными, диагноз можно подтвердить с помощью прямых методов диагностики — темнопольной микроскопии или ПЦР. Материалом для этих исследований служит соскоб с твердого шанкра. Эти анализы покажут, есть ли в язве бледные трепонемы или нет. Подробнее о том, как ведет себя иммунитет человека при сифилисе, читайте в отдельной статье.
  • Наиболее напряженный иммунитет к сифилису вырабатывается во вторичном периоде, когда тело человека полностью покрывается сыпью. В этот период становятся положительными все анализы — и трепонемные, и нетрепонемные. Еще в это время возможно исследование высыпаний с помощью прямых методов диагностики: бледную трепонему можно обнаружить во рту или в мокнущих элементах сыпи.
  • В третичном периоде иммунная система перестраивается, реакция организма приобретает аллергический характер: на коже появляются бугорки и гуммы. Снижаются и исчезают lgM, соответственно становятся отрицательными нетрепонемные тесты. Кроме того, в этот период поражается нервная система, и потому становятся положительными анализы при исследовании спинномозговой жидкости.
  • После полноценного лечения все кожные проявления исчезают, а нетрепонемные тесты становятся отрицательными. Трепонемные тесты могут оставаться положительными в течение нескольких лет и даже в течение всей жизни. О том, что ждет проболевших сифилисом, читайте в статье «Жизнь после лечения сифилиса».
  • Скрытой болезнь может быть как в раннем периоде, так в позднем. В раннем периоде, как правило, становятся положительными трепонемные и нетрепонемные тесты. Исследование спинномозговой жидкости дает отрицательный результат, так как нервная система еще не поражена. В позднем периоде постепенно остаются положительными только трепонемные тесты. Результаты исследования спинномозговой жидкости становятся положительными.

Поздний скрытый и пролеченный сифилис между собой очень похожи: отсутствуют клинические симптомы и остаются положительными серологические реакции. Чтобы различить эти два диагноза, проводят анализ на определение IgM: если антитела «М» есть, то сифилис считается скрытым, если нет — то пролеченным.

Подтвердить или исключить диагноз может только дерматовенеролог. Уролог или гинеколог могут лишь заподозрить болезнь по внешним признакам. И тогда они должны направить пациента к дерматовенерологу для дальнейшего обследования, лечения и наблюдения.

Диагноз «сифилис» основывается на совокупности следующих признаков:

  1. На наличии или отсутствии внешних проявлений и симптомов.
  2. На результатах минимум двух лабораторных исследований: нетрепонемного (РМП, или RW, или RPR) и трепонемного (РПГА или ИФА) тестов.
  3. На данных о том, был ли сифилис ранее, и проводили ли уже его лечение.

Тогда диагностика усложняется. Здесь врачи опираются только на анализы и сведения о проводимом или непроводимом ранее лечении.

  • Если нетрепонемный (один из РМП/RW/RPR) и трепонемный тест (РПГА/ИФА) — положительны, проводится дополнительный альтернативный трепонемный тест (ИФА, если первый тест был РПГА, и наоборот — РПГА, если был ИФА). Если тест становится отрицательным, то кровь пациента направляют в экспертную лабораторию и проводят дополнительные анализы. В случае если второй трепонемный тест становится положительным, ставят диагноз: «скрытый сифилис». Такое состояние может наблюдаться некоторое время после проведенного лечения. Если пациенту было проведено до этого лечение, то для того чтобы подтвердить диагноз, проводят дополнительное исследование на IgM. При положительных результатах — диагноз подтверждается, но исследование все равно рекомендуется повторить через 2 недели. При отрицательных результатах сифилис опровергается.
  • Если нетрепонемный тест (РМП/RW/RPR) отрицательный, а трепонемный (РПГА/ИФА) положительный, то состояние может оцениваться как «поздний сифилис» или «отсутствие сифилиса», если пациенту было проведено ранее полноценное лечение. Для разграничения этих двух состояний проводят дополнительный тест на IgM (ИФАIgM, РИФ-абс-IgM, Иммуноблоттинг-IgM). Если IgM в крови имеются, ставят «поздний сифилис» и лечат. Если нет — пациент считается здоровым.
  • Если RPR (или RW/РМП) положительный, РПГА положительный, а ИФА отрицательный (или наоборот: РПГА «-» и ИФА «+»), то результаты анализов вызывают сомнение и рекомендуется отправить кровь в экспертную лабораторию или провести альтернативные анализы (РИФ, Иммуноблоттинг).
  • Если нетрепонемный тест (PMП/RW/RPR) положительный, а трепонемный (РПГА/ИФА) отрицательный, то проводится дополнительный трепонемный тест (ИФА/РПГА). Если он дает положительный результат, то кровь направляют в экспертную лабораторию. Если отрицательный, то диагноз опровергается, а результат нетрепонемного теста признается ложноположительным.

Для более простого понимания материала приведем таблицу расшифровки результатов клинико-лабораторного исследования пациента:

По материалам polovye-infekcii.ru

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

По материалам microbak.ru

Как известно, современная лабораторная диагностика позволяет выявить заболевание даже на ранних стадиях инфицирования, что является половиной успеха для лечения пациента. В подборе методов обследования очень важен факт выбора нужных и точных анализов, которые позволят врачам-венерологам получить достоверный результат.

Десяток лет назад существовала проблема частых ложных положительных и отрицательных тестов, но в настоящее время в условиях лаборатории и нового оборудования иммунные реакции позволяют гарантировать точность в 98% случаев. Одним из таких анализов является метод ИФА, позволяющий определить сифилис наиболее безошибочно. За счет данного метода специалисты имеют возможность устанавливать правильные диагнозы, быстро определять стадию сифилитической инфекции и формировать корректные схемы лечения.

В ведущих медицинских центрах и современных лабораториях анализ ИФА на сифилис проводится каждому пациенту. Метод иммуноферментного анализа венозной крови пациента позволяет получить либо положительный, либо отрицательный результат, а также определить давность инфицирования.

Метод определения трепонемной инфекции ИФА крайне чувствителен и специфичен. Производители тестовых систем гарантируют качество и подтверждают это на опыте, при сравнении результатов с другими не менее чувствительными методами диагностики.

Так как не каждый пациент знает об особенностях ИФА диагностики при сифилисе, в данной статье мы дадим ответы на вопросы о качестве, преимуществах и показаниях к сдаче данного теста.

Иммуноферментный анализ является основой диагностики многих инфекций, не только венерических и сифилиса в частности. Основан данный метод на определении антител в сыворотке из крови пациента, взятой из вены.

В крови каждого из нас присутствуют особенные структуры белковой природы – антитела, которые представлены разными классами. Одна из главных функций антител – связывание с антигенами и образование определенных комплексов, которые трудно растворяются. За выработку антител ответственны клетки крови – лимфоциты.

При появлении инфекционного возбудителя любого заболевания в крови человека организмом в ответ вырабатываются антитела, которые через свои рецепторы образуют контакт с четко определенными антигенами этого возбудителя. Такой комплекс называется соединением «антигенов + антител». И именно метод ИФА при наличии ферментов и специальных меток в реагентах позволяет регистрировать отдельные комплексы антител и антигенов трепонем.

Определение таких комплексов методом ИФА при инфицировании сифилисом стало возможным только при помощи специальных ферментных составов, которые добавляли к исследуемому материалу. Благодаря этому данный диагностический метод стал активно использоваться для определения отдельных классов иммуноглобулинов, которые появляются на фоне определенной инфекции.

Дополнительно при иммуноферментном анализе определяется качественная и количественная реакция, число нарастания титров антител. Такой анализ на сифилис позволяет оценить состояние организма не только после инфицирования, но и после лечения, для отслеживания динамики на фоне полученной терапии.

В условиях оборудованных лабораторий и медицинских центров определение трепонем методом иммуноферментной реакции может производиться несколькими методами, которые называются прямыми и непрямыми. Однако в основе данных реакций лежит один способ, который позволяет произвести анализ на сифилис методом ИФА. Проводится данный тест определенным образом.

ВАЖНО ЗНАТЬ!

У врача лаборанта имеется специальный планшет – панель с лунками в виде углублений округлой формы в количестве до ста. Используются также специально приготовленные концентрированные антигены к сифилису в наборах для данного анализа, которые помещаются в лунки планшета ИФА. После взятия крови пациента в утренние часы натощак из крови отделяется сыворотка и помещается в лунки с антигенами. В лунках происходит реакция связывания антигена с антителами.

Метод ИФА на сифилис основан на реакции связывания иммунных соединений первого этапа и конъюгатов со специальной ферментной меткой, которая нужна для считывания качества реакции. На данном этапе помимо ферментной пероксидазы вносится хромогенные красящие вещества, для окрашивания материала в зависимости от исхода реакции.

На основании появившихся окрашенных лунок в планшете производится расшифровка теста. В наборах к различным методам ИФА прилагаются таблицы цветовых схем, по которым определяется количество, уровень иммуноглобулинов, антител из сыворотки пациента в 1 единице объема.

Также для оценки исхода реакции используется специальное оборудование — спектрофотометр для проведения фотометрирования и оценки плотности материала в лунках по сравнению с контрольными пробами. На основании плотности и получают результат, четко установленный для каждого возбудителя сифилиса в пределах норм и патологии.

На основании проводимых реакций врачи лаборанты определяют антитела разных классов, типа G, M и A. Данные иммуноглобулины отражают состояние организма, при росте количества М-класса определяется период от времени заражения, чаще всего он не превышает 3 месяцев. При увеличении титра А-класса в большинстве случаев судят о заражении не более месяца назад. При определении G-класса можно определить либо острый период заболевания, либо ранее пролеченный сифилис и состояние после терапии.

В современных лабораториях вы можете встретить такое сокращение диагностических тестов, как «сифилис eia ИФА igg/igm» и «сифилис igg ИФА», что означает анализ иммуноферментным методом для определения суммы антител G и М, или же только G. Такой метод обследования является первичным и показан пациентам, которые ранее не обследовались, то есть обращаются впервые.

На основании суммарных антител можно определить трепонемную инфекцию на ранней стадии инфицирования или в периоде первичных проявлений. Положительным результат ИФА на сифилис становится после окончания периода инкубации трепонем, что занимает в среднем до 1,5 месяцев. У некоторых пациентов метод ИФА на сифилис результативен уже через 20 дней от заражения. Отдельный анализ на выявление класса G иммуноглобулинов позволяет определить состояние после инфицирования и после окончания схемы лечения, а также провести диагностику на всех этапах сифилиса.

В настоящее время реакция ИФА на сифилис является наиболее чувствительной и позволяет достоверно выявлять инфекцию у пациентов не только при скрининг-исследованиях и первых обращениях к врачу-венерологу, но и при наблюдениях в процессе терапии. Иммуноферментный метод позволяет обнаруживать трепонемные антитела и по титру нарастания классов IgM и IgG формировать достоверные результаты.

При этом на этапе первичного обращения или первого обследования тест на сифилис методом ИФА должен дополняться нетрепонемным антикардиолипиновым тестом, реакцией быстрых реагинов RPR или реакцией преципитации РМП. Такие анализы на сифилисы, как РМП ИФА и RPR, позволяют оценить не только факт инфицирования по количеству суммарных антител, но и определить стадию заболевания на основе титра антител, определяемых методом иммуноферментного анализа.

В комплексе данные тесты позволяют определить суммарные антитела к трепонемам и окончательно подтвердить или исключить сифилитическую инфекцию. В процессе обследования, если тест ИФА на сифилис оказывается положительным, дополнительно могут быть показаны другие анализы, например, иммуноблотинг и количественные трепонемные тесты.

Современная лабораторная диагностика венерических болезней представлена многими комплексами анализов для обследования, которые назначать должен только лечащий врач-венеролог. Не стоит самостоятельно выбирать отдельные анализы, так как при неправильном выборе теста или при сдаче анализа в неправильное время полученный результат будет недостоверным. Помимо ИФА сифилис может определяться и другими анализами, однако проводиться все диагностические тесты должны под контролем наблюдающего доктора. Для оценки состояния после лечения также анализы должны быть назначены лечащим венерологом.

Залог правильной диагностики сифилиса – обращение к опытному врачу. Не стоит рисковать своим здоровьем, пытаясь обойтись без врача.

Если вы не знаете к кому обратиться, «Гид по венерологии» готов вам помочь. Наши консультанты быстро помогут выбрать лучшую клинику и квалифицированного специалиста венеролога в вашем городе для консультирования и обследования. Обращайтесь в «Гид по венерологии», ведь мы гарантируем лучшее качество медицинского обслуживания.

СОВЕТУЕМ ПОСМОТРЕТЬ:

По материалам sifilis-guide.com

Понравилась статья? Поделить с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Adblock
detector