Диагностика сифилиса рмп с инактивирующий сывороткой


Статистика заболеваемости сифилисом в России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

  1. В первой группе исследований — тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
  2. Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

  1. Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
  2. Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

  • РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
  • RPR — тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

  1. ИФА — иммуноферментный анализ;
  2. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;
  3. РИФ — реакция иммунофлюоресценции;
  4. иммуноблоттинг;
  5. ИХЛ — иммунохемилюминесценция;
  6. РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

  • Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
  • Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

  1. Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
  2. Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
  3. В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

Преимущество бюджетных учреждений состоит в том, что там эта услуга бесплатна. Существенный минус заключается во времени ожидания анализа, слабом материально-техническом обеспечении некоторых государственных поликлиник и в том, что если сифилис выявят, то скрыть этот факт будет затруднительно.

Частные клиники и лаборатории согласны работать с пациентами на условиях конфиденциальности. Это подойдет тем, кто не хотел бы, чтобы о его заболевании стало известно. Но следует помнить, что бланк с результатом, где не фигурирует имя пациента, не подлежит приему ни в одной организации.

Разумеется, за анализ в частном учреждении придется заплатить, но и результат можно будет узнать через 2-3 дня. Более того, многие клиники без проблем предлагают экспресс-тестирование и сообщают о результатах анализов уже через пару часов.

Ценник на анализ зависит от его вида. Скрининговое исследование обойдется пациенту в 300-400 рублей. Анализ, при котором определяют наличие ДНК в том или ином типе биоматериала, будет стоить в районе 500 рублей.

Разумеется, цены варьируются в зависимости от лабораторий, используемых материалов и итоговой точности самого теста. В этом случае нередко работает правило, согласно которому чем тест дороже, тем он точнее.

Сифилис — коварное заболевание, которое медленно, но верно не только уничтожает внутренние органы, но и затрагивает всю нервную систему человека. К счастью, эта болезнь развивается неспешными темпами, а наука выявила эффективные методы борьбы с ней еще в то время, когда изобрела пенициллин, к которому трепонемы уязвимы до сих пор. Так что главное — вовремя пройти качественное обследование, а после этого обратиться к знающему врачу.

Также вы можете посмотреть видео в этой статье, где врач расскажет вам о РИФ анализе на сифилис.

По материалам myvenerolog.com

Набор укомплектован сывороктами контрольными для диагностики сифилиса (положительной и отрицательной)

Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы (сыворотки) крови или спинно-мозговой жидкости (СМЖ) человека в реакции микропреципитации (РМП).

Тест основан на взаимодействии кардиолипинового антигена (АгКЛ), аналогичного липопротеиновому антигену Treponema pallidum, с соответствующими антителами (реагинами), которые появляются в плазме (сыворотке) нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинно-мозговой жидкости – через 4-8 недель после заражения.

Взаимодействие АгКЛ с реагинами приводит к реакции микропреципитации (выпадение хлопьев разной величины) и регистрируется визуально.

Комплект № 2 (кат. № 03.07.1, кат. № 03.07.2, кат. № 03.07.3) включает:

Взвесь АгКЛ – взвесь АгКЛ в 10 % растворе холин-хлорида, содержащая кардиолипина – 0,033 %; лецитина – 0,27 %, холестерина – 0,9 %, ЭДТА (стабилизатор) в конечной концентрации 0,0125 моль/л и тимеросал (консервант) в конечной концентрации 0,1 %. Суспензия молочно-белого цвета, при отстаивании разделяющаяся на опалесцирующую бесцветную жидкость и плотный осадок белого цвета

кат. № 03.07.1 — 3 флакона (по 5,0 мл)

кат. № 03.07.2 — 6 флаконов (по 5,0 мл).

кат. № 03.07.3 — 7 флаконов (по 10 мл).

Базовый вариант комплекта № 2 рассчитан на исследование 500 образцов (кат. № 03.07.1) , 1000 образцов (кат.№ 03.07.2), 2000 образцов (.(кат.№ 03.07.3)

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число упаковок с реагентами и их объем) может быть изменена.

Возможна дополнительная комплектация набора положительной и отрицательной контрольными сыворотками для диагностики сифилиса производства ЗАО «ЭКОлаб» (ТУ 9398-096-70423725-2008, РУ № ФСР 2009/05912 от 22.10.09) (кат. №03.07.1к — 500 определений, № 03.072к -1000 определений, кат. № 03.07.3к — 2000 определений)– в количестве, определяемом заявкой потребителя, а также стеклянными и пластиковыми слайдами для постановки реакции.

Реакцию проводят с плазмой (сывороткой, инактивированной при температуре 561 o C в течение 30 мин) крови или СМЖ, получаемыми стандартными методами.

Образцы плазмы (сыворотки) крови с выраженным гемолизом, гиперлипидемией и бактериальным ростом исследованию не подлежат.

Образцы, предназначенные для исследования, могут храниться от 2 до 8 о С не более 7 сут, допустимо их длительное хранение в замороженном состоянии при температуре минус 20 о С и ниже. Повторное замораживание размороженных образцов не допускается.

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами следует обращаться как с потенциально инфицированными материалами.

По материалам shop.labprep.ru

Нетрепонемные тесты:

реакция микропреципитации (РМП) с плазмой и инактивированной сывороткой или ее аналоги:

RPR (РПР) –тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins), или экспресс-тест на реагины плазмы;

VDRL –Venereal Disease Research Laboratory test – тест Исследовательской лаборатории венерических заболеваний;

TRUST –тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой (Toluidin Red Unheated Serum Test);

USR –тест на реагины с непрогретой сывороткой (Unheated Serum Reagins);

Общая характеристика нетрепонемных тестов:

– применяется антиген нетрепонемного происхождения (стандартизованный кардиолипиновый антиген);

– позитивируются через 1-2 недели после образования первичной сифиломы;

– имеют невысокую чувствительность (до 70–90% при ранних формах сифилиса и до 30% — при поздних), могут давать ложноположительные результаты (3% и более).

Преимущества нетрепонемных тестов:

– техническая простота выполнения;

– быстрота получения результатов.

Показания к применению нетрепонемных тестов:

– проведение скрининга населения на сифилис;

– определение активности течения инфекции (определение титров антител);

– контроль эффективности терапии (определение титров антител).

Трепонемные тесты:

ИФА (иммуноферментный анализ) — высокочувствительный и специфичный тест. Чувствительность при первичном и вторичном сифилисе – 98-100%, специфичность – 96-100%. Дает возможность дифференцированного и суммарного определения IgM и IgG антител к возбудителю сифилиса;

иммуноблоттинг является модификацией ИФА. Чувствительность и специфичность – 98-100%. Может применяться для подтверждения диагноза, в особенности при сомнительных или противоречивых результатах других трепонемных тестов.

Относительно новыми для использования в Российской Федерации являются методы выявления трепонемоспецифических антител, основанные на методах иммунохемилюминесценции (ИХЛ) и иммунохроматографии (ИХГ).

метод ИХЛ (иммунохемилюминесценции), обладающий высокой чувствительностью и специфичностью (98-100%), дает возможность количественного определения уровня антител к возбудителю сифилиса, может быть использован для подтверждения сифилитической инфекции и скрининга. Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии, может давать ложноположительный результат.

ПБТ (простые быстрые тесты у постели больного, или иммунохроматографические тесты)позволяют проводить быстрое определение содержания трепонемоспецифических антител к возбудителю сифилиса в образцах сыворотки и цельной крови без использования специального лабораторного оборудования и применяться при оказании первичной медико-санитарной помощи, в том числе по эпидемиологическим показаниям. Ограничения применения: не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, могут давать ложноположительный результат.

РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) – высокочувствительный и специфичный тест. Чувствительность метода при первичном сифилисе – 76%, при вторичном — 100%, при скрытом – 94-97%, специфичность – 98-100%;

РИФ (реакция иммунофлуоресценции, в том числе в модификациях РИФабс и РИФ200) – достаточно чувствительна на всех стадиях сифилиса (чувствительность при первичном сифилисе – 70-100%, при вторичном и позднем – 96-100%), специфичность – 94-100%. РИФ применяется для дифференциации скрытых форм сифилиса и ложноположительных результатов исследований на сифилис;

РИБТ (РИТ) (реакция иммобилизации бледных трепонем) – классический тест для выявления специфических трепонемных антител; чувствительность (суммарно по стадиям сифилиса) составляет 87,7%; специфичность – 100%. Трудоемкий и сложный для постановки тест, требующий значительных средств для проведения тестирования. Сфера применения РИБТ сужается, однако она сохраняет свои позиции как «реакция-арбитр» при дифференциальной диагностике скрытых форм сифилиса с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис.

Общая характеристика трепонемных тестов:

– применяется антиген трепонемного происхождения;

– чувствительность – 70-100% (в зависимости от вида теста и стадии сифилиса);

РИФ, ИФА, иммуноблоттинг (ИБ) становятся положительными с 3-й недели от момента заражения и ранее, РПГА и РИБТ — с 7–8-й.

Преимущества трепонемных тестов: высокая чувствительность и специфичность.

Показания к применению трепонемных тестов:

– подтверждение положительных результатов нетрепонемных тестов;

– подтверждение в случае расхождения результатов скринингового трепонемного теста и последующего нетрепонемного теста, а также скринингового и подтверждающего трепонемных тестов;

– проведение методами ИФА, РПГА, ИХЛ, ПБТ скрининга отдельных категорий населения на сифилис (доноры, беременные, больные офтальмологических, психоневрологических, кардиологических стационаров, ВИЧ-инфицированные).

Примечания:

– трепонемные тесты не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, т.к. антитрепонемные антитела длительно циркулируют в организме больного, перенесшего сифилитическую инфекцию;

– трепонемные тесты дают положительные результаты при невенерических трепонематозах и спирохетозах;

– трепонемные тесты могут давать ложноположительные реакции у больных с аутоиммунными заболеваниями, лепрой, онкологичекими заболеваниями, эндокринной патологией и при некоторых других заболеваниях.

В зависимости от целей серологическое обследование населения на сифилис осуществляется с использованием разных методов:

Ложноположительные серологические реакции на сифилис (ЛПР)

Ложноположительными, или неспецифическими, называют положительные результаты серологических реакций на сифилис у лиц, не страдающих сифилитической инфекцией, и не болевших сифилисом в прошлом.

ЛПР могут быть обусловлены техническими погрешностями при выполнении исследований и особенностями организма. Условно ЛПР разделяют на острые ( 6 месяцев). Острые ЛПР могут наблюдаться при беременности и во время менструации, после вакцинации, после недавно перенесенного инфаркта миокарда, при многих инфекционных заболеваниях (лепра, малярия, респираторные заболевания, грипп, ветряная оспа, вирусный гепатит, ВИЧ-инфекция) и дерматозах; хронические ЛПР — при аутоиммунных заболеваниях, системных болезнях соединительной ткани, онкологических заболеваниях, хронической патологии печени и желчевыводящих путей, при сердечно-сосудистой и эндокринной патологии, при заболеваниях крови, при хронических заболеваниях легких, при инъекционном применении наркотиков, в старческом возрасте и др.

Ложноположительные реакции трепонемных и нетрепонемных тестов могут наблюдаться при эндемических трепонематозах (фрамбезия, пинта, беджель), боррелиозе, лептоспирозе. Пациента с положительными серологическими реакциями на сифилис, прибывшего из страны с эндемическими трепонематозами, необходимо обследовать на сифилис и назначить противосифилитическое лечение, если оно ранее не проводилось.

Хронические ложноположительные реакции могут являться преклиническими проявлениями тяжелых заболеваний.

Количество ЛПР увеличивается с возрастом. В возрастной группе 80-летних лиц распространенность ЛПР составляет 10%.

Ложноотрицательные серологические реакции на сифилис могут наблюдаться при вторичном сифилисе вследствие феномена прозоны при тестировании неразведенной сыворотки, а также при обследовании лиц с иммунодефицитным состоянием, например ВИЧ-инфицированных пациентов.

Диагностика нейросифилиса.

Решающую роль в диагностике нейросифилиса играет исследование цереброспинальной жидкости (ЦСЖ).

Спинномозговая пункция для исследования ЦСЖ показана больным сифилисом при наличии у них клинической неврологической симптоматики (независимо от стадии заболевания); лицам со скрытыми, поздними формами инфекции; больным с проявлениями вторичного рецидивного сифилиса (в частности, с лейкодермой, особенно в сочетании с алопецией); при подозрении на врожденный сифилис у детей; при отсутствии негативации нетрепонемных серологических тестов у пациентов после проведенного полноценного специфического лечения.

Диагноз нейросифилиса с симптомами устанавливается на основании сочетания клинических проявлений с положительными результатами серологических тестов с ЦСЖ и изменением состава последней (числа клеток и уровня белка), скрытого — на основании лабораторного выявления патологических изменений ЦСЖ.

К рекомендуемым методам исследования ЦСЖ относятся: цитологическое исследование с подсчетом количества форменных элементов, определение количества белка, а также серологические тесты для выявления антител к T. pallidum: РМП, РИФц (РИФ с цельным ликвором), РПГА, ИФА, иммуноблоттинг.

Плеоцитоз и повышение уровня белка в ликворе не являются специфичными для нейросифилиса, но имеют важное диагностическое значение как критерии развития воспалительных процессов оболочек и органических поражений вещества мозга. Определение в 1 мм 3 ликвора свыше 5 клеток лимфоцитарного ряда свидетельствует о наличии патологических изменений в нервной системе. Содержание белка в ликворе взрослого человека в норме составляет 0,16–0,45 г/л. Специфичность нетрепонемных тестов с ЦСЖ близка к 100%, однако их чувствительность недостаточно высока, а частота отрицательных результатов при различных формах нейросифилиса варьирует от 30 до 70%. Трепонемные тесты, напротив, обладают высокой чувствительностью (90-100%), но недостаточно специфичны и могут быть положительными с ликвором при формах сифилиса, не сопровождающихся поражением нервной системы, однако отрицательные результаты трепонемных тестов с ЦСЖ исключают нейросифилис.

В настоящее время не существует универсального теста, который позволил бы однозначно подтвердить или опровергнуть диагноз нейросифилиса, а также отличить антитрепонемные антитела, пассивно проникающие в центральную нервную систему из сыворотки, от местно синтезируемых. Диагноз устанавливают на основании комплекса критериев.

Для диагностики нейросифилиса может быть использован реверсивный алгоритм, включающий последовательное применение современных методов лабораторной диагностики: ИФА/иммуноблоттинга, РМП/РПР и РПГА. Тестированию с помощью данного алгоритма подлежат лица с подозрением на наличие нейросифилиса, в том числе больные скрытым сифилисом и лица, перенесшие сифилис в прошлом, при сохранении положительных нетрепонемных серологических реакций крови. Тестирование начинается с исследования ликвора пациента методами ИФА или иммуноблоттинга. При отрицательном результате с высокой степенью вероятности может быть сделан вывод об отсутствии у пациента нейросифилиса. При положительном результате ИФА/ИБ проводится исследование с помощью одного из нетрепонемных тестов (РМП, РПР). Если ИФА/ИБ и РМП/РПР дают положительный результат, больному устанавливается диагноз нейросифилиса и дальнейшее тестирование прекращают. Если РМП/РПР дает отрицательный результат, проводится тестирование ликвора с помощью второго высокочувствительного и специфичного трепонемного метода – РПГА. При положительном результате РПГА делается вывод о наличии у больного нейросифилиса. При отрицательном результате РПГА делается вывод об отсутствии у пациента нейросифилиса и ложноположительном результате первого трепонемного теста.

Для диагностики нейросифилиса дополнительно используют инструментальные методы: магнитно-резонансную и компьютерную томографии, электроэнцефалографию. Результаты неинвазивных нейровизуализационных исследований при нейросифилисе неспецифичны и применяются для оценки объема поражения и топической диагностики.

Диагноз нейросифилиса считается подтвержденным при наличии у пациента серологически доказанного сифилиса, независимо от стадии и положительном результате РМП (РПР) с цереброспинальной жидкостью.

Диагноз нейросифилиса считается вероятным при:

— наличии у пациента серологически доказанного сифилиса, независимо от стадии;

— наличии неврологической/ психиатрической/ офтальмологической/ отологической симптоматики, которая не может быть объяснена иными причинами;

отрицательном результате РМП (РПР) с цереброспинальной жидкостью;

— наличии плеоцитоза (более 5 клеток в 1 мм 3 ликвора) и/или повышении уровня белка (более 0,5 г/л), которые не могут быть обусловлены другими заболеваниями.

По материалам infopedia.su

АНТИГЕН КАРДИОЛИПИНОВЫЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ

(Сифилис-АгКЛ-РМП)

Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы или инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации (РМП).

Набор рассчитан на проведение 1000 определений.

ПРИНЦИП МЕТОДА

В антигенных структурах Treponema pallidum имеется липопротеиновый антиген, в ответ на который в организме больного формируются «реагины», представляющие собой смесь антител классов M и G. Реагины появляются в сыворотке нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинно-мозговой жидкости через 4-8 недель после заражения. Антигенный комплекс, возникающий в спиртовом растворе кардиолипина, лецитина и холестерина (АгКЛ), способен связываться с реагинами, что и регистрируется в реакции микропреципитации (выпадение хлопьев разной величины).

Реагент 1 – антиген кардиолипиновый (АгКЛ) — раствор в спирте этиловом абсолютированном трех высокоочищенных липидов: кардиолипина — 0,03 %; лецитина — 0,27 % и холестерина — 0,9 %; 10 ампул (по 2,0 мл).

Реагент 2 – раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл).

Реакцию проводят с плазмой или инактивированной сывороткой обследуемых лиц. Для постановки реакции кровь берут из пальца. Перед взятием крови в пробирку вносят 5,0%-ный раствор натрия лимоннокислого, взятого капилляром аппарата Панченкова до метки “50”. Затем тем же капилляром набирают кровь дважды до отметки “0” и вносят в ту же пробирку, перемешивают с раствором натрия лимоннокислого и центрифугируют (если необходимо вскоре после взятия крови приступить к исследованию) при 1000-2000 об/мин в течение 15 минут.

Полученную плазму используют для проведения реакции микропреципитации. При постановке реакции с сывороткой кровь берут из вены в объеме 5-10 мл, отделяют ее от сгустка, инактивируют при температуре (56+1) 0 С в течение 30 мин и используют в реакции.

Пробы, предназначенные для исследования, могут храниться до 5 дней при температуре (6+2) о С или не более 6 недель при минус 20 о С.

Потенциальный риск применения набора – класс 1.

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

· Центрифуга лабораторная, обеспечивающая угловую скорость 1000-2000 об/мин;

· термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру прогревания (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно;

· пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

· пробирки вместимостью 10 мл;

· вода очищенная (дистиллированная или деионизированная);

· 0,9% раствор натрия хлористого;

· стекло или пластина из плексигласа;

· перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление эмульсии АгКЛ

Перед приготовлением эмульсии проверить прозрачность ампулированного антигена. При выпадении кристаллов холестерина их растворить нагреванием ампул в термостате или водяной бане при температуре (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно.

К определенному объему 0,9 % раствора натрия хлористого добавить равный объем антигена кардиолипинового. Смесь перемешать и оставить при комнатной температуре на 30 мин, после чего центрифугировать при 1000-2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость слить. К осадку добавить 3,5 объема (по отношению к взятому антигену) 10 % раствора холин-хлорида на 0,9 % растворе натрия хлористого.

Хранить антигенную эмульсию в плотно закрытой стеклянной емкости без доступа света не более 6 сут. при температуре (4+2) 0 С.

Допускается хранение антигенной эмульсии при комнатной температуре в течение 14 сут. при условии внесения в нее мертиолята натрия до конечной концентрации 0,01 %.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

На обычное стекло или углубление пластинки из плексигласа наносят 3 капли нативной плазмы или инактивированной сыворотки, затем добавляют 1 каплю антигенной эмульсии. Ингредиенты перемешивают покачиванием пластины в течение 5 мин, затем в каждую лунку добавляют по три капли 0,9 % раствора натрия хлористого, вновь перемешивают покачиванием пластины и оставляют при комнатной температуре на 5 мин (оптимальный температурный режим реакции 23-28 0 С).

Учет результатов реакции

Результаты реакции учитываются при освещении не ниже 300 люкс. При исследовании плазмы или инактивированной сыворотки от больных сифилисом наблюдается положительная реакция в виде выпадения хлопьев разной величины, а с плазмой или инактивированной сывороткой от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 10 до 25 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Срок годности набора – 1 год.

По вопросам приобретения и использования набора следует обращаться по адресу: Ташкент, ул.Мавлянова, 26/1. ООО «Denis Med»; тел. (8-371) 235-42-44, 235-15-84, 233-64-59.

По материалам apteka.uz

Понравилась статья? Поделить с друзьями:
Adblock
detector